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                  大腸桿菌DH5α化學感受態細胞使用說明書

                  2024-01-31 10:55 來源:上海遠慕生物試劑
                  中文名稱:大腸桿菌DH5α化學感受態細胞
                  英文名稱:E.coli DH5α Chemical Competent Cell
                  產品規格:0.1mL*10

                  本產品是采用大腸桿菌DH5α菌株經特殊工藝處理得到的感受態細胞,可用于DNA的熱擊轉化。DH5α是一種常用于質??寺〉木?,其φ80lacZΔM15基因產物可與載體編碼的β-半乳糖苷酶氨基端實現α互補,可用于藍白斑篩選。recA1和endA1的突變有利于克隆DNA的穩定和高純度質粒DNA的提取。使用pUC19質粒檢測,轉化效率不低于107,適用于高效的質粒DNA克隆并能保證高拷貝質粒的穩定復制。

                  本菌種來源于Hoffman-Berling 1100菌種。
                   
                  基因型 表現型
                  deo R 組成型合成脫氧核糖
                  end A1 核酸內切酶I缺失
                  gyr A96 具有萘啶酮酸抗性
                  hsd R17 限制性酶EcoK缺失
                  △(lac)U169 lac基因缺失
                  rec A1 DNA重組活性降低
                  Rel A1 允許在無蛋白質合成時有RNA合成
                  sup E44 抑制琥珀突變突變,為某些噬菌體必需
                  thi-1 不能自身合成硫氨
                  φ80(lac ZΔM15) 提供α-互補所需的ω片斷

                  儲存條件:干冰運輸、-80℃保存,有效期半年。

                  使用方法:
                  1. 取感受態細胞置于冰浴中。一次轉化感受態細胞的建議用量為50-100μl,可以根據實際情況分裝使用。
                  以下實驗以50μL感受態細胞為例。
                  2. 待感受態細胞融化后,向感受態細胞懸液中加入目的DNA(根據實際情況加入適量的DNA,通常100μl感受態細胞能夠被1ng超螺旋質粒DNA所飽和),用移液器輕輕吹打混勻,冰浴30分鐘。
                  3. 42℃熱擊90秒,迅速將離心管轉移到冰浴中,冰上靜置2-3分鐘。
                  4. 每個離心管中加入800μl無菌的SOC或LB培養基(不含抗生素),混勻后置于37℃搖床,200rpm(小于225rpm)振蕩培養45分鐘使菌體復蘇。
                  5. 根據實驗需求,取適量已轉化的感受態細胞,加到含相應抗生素的SOC或LB固體瓊脂培養基上,用無菌的涂布棒將細胞均勻涂開,將平板置于37℃直至液體被吸收,倒置培養,37℃培養12-16小時。

                  注意事項:
                  1、涂布用量可根據具體實驗調整。若轉化的DNA總量較多,可取少量轉化產物涂布平板;若轉化的DNA總量較少,可取200-300μl轉化產物涂布平板。若預計的克隆數較少,可通過離心(4,000rpm ,2分鐘)后吸除部分培養液,懸浮菌體后將其涂布于平板中。
                  2、新制備的固體培養基不易涂干,可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
                  3、涂布剩余的菌液可置于4℃保存,如果次日的轉化菌落數過少,可以將剩下的菌液再涂布新培養基進行培養。
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